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班超奉命出使西域，实际是西域各族人民受匈奴奴隶主残暴压迫，不堪忍受痛苦，恳切向汉廷要求遣派都护之请。公元73年班超出使时，西域已归入中国版图一百多年，西域各族人民都乐汉衣服制度，所以班超没有多带军队，仅带吏士三十六人西行。他环顾西域形势，没有先走塔里木盆地北道，而是先走塔里木盆地南道。在那里站稳脚跟后，再拼力歼灭北道匈奴势力，这是重要的战略决策。如果当时班超要先走塔里木盆地北道，阻力重重，一时难于完成使命。
  那时塔里木盆地南道各绿洲虽已为匈奴势力所控制，但并不牢固，班超深知西域各族人民维护统一，共击匈奴的迫切愿望。因而他到鄯善不久，匈奴使者也带着一百多人来到鄯善。班超虽只有三十六人，立即攻歼了匈奴使者及其随员，然后“召鄯善王广，以虏首示之，一国震怖，超晓告抚慰，遂纳子为质①。
  从鄯善向西，原有大国于阗、莎车、疏勒，而此时于阗王广德新攻破莎车，遂雄张南道，唯匈奴王“遣使监护其国”②。超至于阗后，依靠于阗人民及其出众的谋略、胆略，胁使于阗王广德攻杀匈奴使者后降超，不仅震惊了西域各国，更震惊了西域的匈奴贵族。
  当班超在鄯善、于阗击灭匈奴分裂势力的时候，为匈奴所立的龟兹王建已遣兵攻破疏勒，杀其王，而立龟兹人兜题为疏勒王。永平十七年（公元74年）班超只好从间道至疏勒。去兜题所居槃橐城九十里，在疏勒绿洲上展开了和匈奴分裂势力的斗争；而永平十八年（公元75年）匈奴分裂势力乘都护陈睦被击杀之机，数度发兵进攻疏勒的班超阵地。超虽士吏单少，但依靠疏勒人民，英勇无畏地坚守槃橐城岁余。汉章帝初立，恐超单危不能自立，即下诏征超还。疏勒人民闻讯，“举国忧恐”。其都尉黎弇说：“汉使弃我，我必复为龟兹所灭耳。诚不忍见汉使去。③超还至于阗，王侯以下皆痛哭说：“依汉使如父母，诚不可去。”④互抱超马脚，不得行。班超决定再返疏勒。
  疏勒两城自班超离去后，复降盘踞在龟兹的匈奴，而与尉头连兵。超即捕斩反者，击破尉头，杀六百余人，疏勒复安。建初三年（公元78年）班超又率疏勒、康居、于阗、扜弥兵一万余人攻破了受匈奴势力控制的姑墨石城。班超想乘胜肃清天山以南各国的匈奴分裂势力，即向朝廷上疏请兵，他在疏状中分析了当时西域的形势说：“臣窃见先帝欲开西域，故北击匈奴，西使外国、鄯善、于阗，即地向化。今扜弥、莎车、疏勒、月氏、乌孙、康居，复原归附，欲共拼力，破灭龟兹，平通汉道。若得龟兹，则西域不服者百分之一耳..今西域诸国，自日之所入，莫不向化，大小欣欣，贡奉不绝。唯焉耆、龟兹独未服从。臣前与官属三十六人奉使绝域，备遭艰阢。自臣孤守疏勒，于今五载，胡夷情数，臣颇识之，问其城郭小大，皆言“倚汉与倚天等’。以是效之，则葱岭可通，葱岭通则龟兹可伐。今宜拜龟兹侍子白霸为其国王，以步骑数百送之，与诸国连兵，岁月之间，龟兹可擒，以夷狄攻夷狄，计之善者也。”⑤朝廷批准了班超的部署。
  班超在汉廷的支持下，首先在公元75年肃清疏勒地区的匈奴势力。建初8年（公元83年）以将兵长史名号与军司马徐斡，卫侯李邑亲至乌孙，大加赏赐，并联结乌孙力量，以图夹击龟兹。当然疏勒是一块战略重地，匈奴费尽心机要争夺这块土地，因此它在失败后，曾先后向康居及月氏借兵，企图挽回败局，但班超都一一挫败了敌人的阴谋。永元二年（公元90年）月氏虽遣其副王谢将兵七万越帕米尔高原，直下疏勒绿洲，攻班超。时班超虽然人数少，不足以御强敌，但他依靠疏勒人民，镇定自若，采用坚壁清野之法，“收谷坚守”。超度月氏军队粮食将尽时，必往龟兹求救，预先即于东通龟兹要道上埋伏数百精兵待敌，后来月氏统帅谢果遣骑赉金银珠玉以贿龟兹，班超的伏兵尽起遮击，袭杀月氏兵，遂即持其使首送往月氏谢统帅处。谢大惊，立即“遣使请罪，愿得生归”①。超即准其撤退回国。月氏由是大震，只好岁奉贡献。
  匈奴眼看大势已去，龟兹、姑墨、温宿即于永元三年（公元91年）降于班超，至是西域又重新统一在东汉的号令之下，汉廷即以班超为西域都护，徐斡为长史。班超即把西域都护府从乌垒城迁到龟兹的它乾城，徐斡则屯驻疏勒。这时西域只有焉耆、危须、尉犁几国未平。班超为了先巩固都护所驻的龟兹绿洲，即撤换了由匈奴所立的龟兹王尤利多，而扶持了曾为汉廷侍子的白霸为龟兹王。
  在龟兹地区的政局初步获得稳定后，班超即于永元六年（公元94年）秋，发龟兹鄯善等八国兵七万人，及吏士贾客千四百人，讨伐叛服无常的焉耆王，“遂斩焉耆、尉犁二王首，传送京师..超乃立焉耆左侯元孟为王”②。于是西域五十余国悉皆纳质内属，只有到这时西域的匈奴分裂势力才真正肃清了，才能把西域都护府从乌垒迁到它乾城，从轮台地区迁到经济、文化最发达而又最适中的龟兹绿洲。
  班超在西域活动三十年，依靠东汉政府做后盾，依靠西域各族人民的支持，凭借自己的智慧和胆略，使西域各族人民摆脱了北匈奴的奴役，统一西域全境，使丝绸之路更为繁荣昌盛。永元七年（公元95年）汉和帝下诏赞扬班超的功绩说：“超遂逾葱岭，远悬度，出入二十二年，莫不宾从。改立其王，而绥其人。不动中国，不烦戎士，得远夷之和，同异俗之心，而致天诛，蠲宿恥，以报将士之仇。”据此突出功绩，和帝封班超为定远侯。